2022年4月26日，Springer Nature出版的Methods in Molecular Biology系列叢書Extracellular Vesicles in Diagnosis and Therapy在線發(fā)表了中國科學(xué)院上海營養(yǎng)與健康研究所楊黃恬研究組題為“Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles Secreted from Human Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiovascular Progenitor Cells”的工作。該工作介紹了從人多能干細胞源心血管前體細胞（hPSC-CVPCs）條件培養(yǎng)基中高效分離細胞外囊泡（EVs）及其特征鑒定的方法。
心肌梗死（心梗）及其導(dǎo)致的心力衰竭（心衰）是心血管疾病的主要致死原因，嚴重威脅人類健康。近年我們和其它實驗室的臨床前研究證明移植hPSCs衍生心血管細胞可有效改善心梗后心功能、縮小纖維疤痕，其機制與旁分泌介導(dǎo)的促進心肌細胞存活和增殖、血管新生和抑制心肌病理性重構(gòu)有關(guān)，其中EVs發(fā)揮著重要作用。我們組前期工作發(fā)現(xiàn)hCVPC-EVs有效減少心梗后心肌細胞凋亡、促進血管生成和減少纖維疤痕形成、改善心臟功能。EVs的生物學(xué)功能除了依賴于其母細胞性質(zhì)外，與其分離方法密切相關(guān)。不同分離方式可影響EVs純度、活性、生物學(xué)特征及應(yīng)用療效。因此，如何快速、高效獲得高純度、高活性的EVs是進行EVs功能和修復(fù)機制研究的前提條件。
本工作描述了一種從hPSC-CVPCs條件培養(yǎng)基中獲得EVs的高效分離和特征鑒定方法。本方法收集的hPSC-CVPCs條件培養(yǎng)基，通過高速離心去除死細胞、細胞碎片和其他大顆粒物質(zhì)，最后通過超速離心收集獲得hCVPC-EVs。獲得的hCVPC-EVs呈現(xiàn)典型的雙分子層囊泡結(jié)構(gòu)，大小在110-118納米左右，純度高，表達典型EVs的標記蛋白，包括Alix、TSG101、CD63、CD9和CD81。相較于試劑盒法等其它分離方法，該方法通量大、操作簡單、可分離得到大小均一、純度高的EVs。我們的研究證明通過該法獲取的EVs適合進行后續(xù)的一系列體內(nèi)、外包括動物疾病模型的研究，hCVPC-EVs心肌注射可有效促進心梗心肌修復(fù)。因此，本方法為大量、高純度的EVs的獲取提供了一種方案。
Extracellular Vesicles in Diagnosis and Therapy一書由Maurizio Federico和Barbara Ridolfi主編。該書詳細介紹了從小鼠到人體、從細胞培養(yǎng)基到體液、從干細胞到癌癥細胞等不同來源的EVs分離、檢測和分析方法。第一章介紹了EVs的檢測和分離方法；第二章介紹了從不同組織、器官或體液中分離和鑒定EVs方法，包括胎盤、hPSC-CVPCs、唾液和尿液來源；第三章介紹了EVs內(nèi)含物的分析方法，包括對EVs中miRNA、磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)、脂質(zhì)組學(xué)的鑒定分析；第四章介紹了EVs的工程化改造，包括利用熒光蛋白標記EVs，EVs作為遞送載體等。該書提供的EVs相關(guān)詳細資料，包括完整的材料和試劑列表、可重復(fù)的詳細的實驗步驟，以及實驗中可能碰到的問題及解決方法，對EVs的研究及轉(zhuǎn)化應(yīng)用具有重要的科學(xué)意義和實用價值。
楊黃恬研究員為該文通訊作者，博士研究生吳強為第一作者。該工作得到科技部國家重點研發(fā)計劃“干細胞及轉(zhuǎn)化研究專項”、中國科學(xué)院先導(dǎo)計劃、國家自然科學(xué)基金委項目、張江國家自主創(chuàng)新示范區(qū)專項發(fā)展資金重點項目的支持。
????????
圖. 書的封面及protocol題目
原文鏈接：https://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-0716-2341-1_7
官方微信
